CITOMETRÍA DE FLUJO
INTRODUCCION.
La citometría constituye un complemento valioso de las
técnicas clásicas utilizadas para el estudio de la morfología, biología y
bioquímica celular. Aunque, desde el punto de vista cronológico, la citometría
de flujo es una tecnología relativamente reciente, sus características
especiales como técnica de análisis celular han hecho que en la última década
su uso se haya extendido de forma rápida, desde los laboratorios de
investigación básica hasta los laboratorios clínicos 1.
La citometría de flujo ha encontrado amplia
utilidad en ciencias como la inmunología, hematología, oncología, anatomía
patológica y biología celular 2.
La conjugación de marcadores fluorescentes con anticuerpos monoclonales o
policlonales ha hecho posible los estudios de la densidad y la distribución de
determinantes y receptores de la superficie y del citoplasma celular,
permitiendo identificar subpoblaciones celulares 3.
DEFINICIÓN.
La citometría de flujo (CMF) es una técnica de análisis celular
multiparametrico cuyo fundamento se basa en hacer pasar una suspensión de
partículas (generalmente células) alineadas y de una en una por delante
de un haz de láser focalizado.
La citometría de flujo es una tecnología (proceso) que permite la medida
simultánea de múltiples características físicas de una sola célula. Estas
medidas son realizadas mientras las células (partículas) pasan en fila, a una
velocidad de 500 a 4000 células por segundo, a través del aparato de medida en
una corriente de fluido 4.
La citometría de flujo es un método analítico que permite la medición
rápida de ciertas características físicas y químicas de células o partículas
suspendidas en líquido que producen una señal de forma individual al interferir
con una fuente de luz. Una de las características analíticas más importantes de
los citómetros de flujo es su capacidad de medir múltiples parámetros
celulares, como el tamaño, forma y complejidad y, por supuesto, cualquier
componente celular o función que pueda ser marcada con un fluorocromo.
PRINCIPIO BÁSICO.
El principio en el que se basa esta tecnología es simple: hacer pasar células u otras partículas en suspensión alineadas y de una en una por delante de un haz luminoso. La información producida puede agruparse en dos tipos fundamentales: la generada por la dispersión de la luz y la relacionada con la emisión de luz por los fluorocromos presentes en la célula o partícula al ser excitados por el rayo luminoso. Las señales luminosas detectadas se transforman en impulsos eléctricos que se amplifican y se convierten en señales digitales que son procesadas por una computadora (ver figura 1).
Figura 1.
Para complementar la información ver el siguiente vídeo.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
1.
Orfao A, Ciudad J, López A,
López-Berges MC, Vidriales B, Macedo A, et al. La citometría de flujo en el
diagnóstico clínico. Servicio General de Citometría. Universidad de Salamanca,
1993.
2. Orfao A, González M, Ciudad J,
López-Berges MC, López A, San Miguel JF, et al. Aplicaciones de la citometría
de flujo en el diagnóstico hematológico. Biol Clin Hematol 1992;13:456-523.
3. Goding
JS. Conjugation of Antinodies with Fluorochromes Modifications to the Standard
Methods. J Immunol Meths 1976;13:215-223.
interesante información
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